Abstract
A sensitive and accurate analytical method for the determination of methyl-, ethyl-, propyl- and butylparaben and bisphenol A in human milk samples has been developed and validated. The combination of ultrasound-assisted extraction (UAE) and a simplified and rapid clean-up technique that uses sorbent materials has been successfully applied for the preparation of samples prior to ultra-high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry (UHPLC–MS/MS) analysis. The analytes were extracted from freeze–dried human milk samples using acetonitrile and ultrasonic radiation (three 15-min cycles at 70% amplitude), and further cleaned-up with C18 sorbents. The most influential parameters affecting the UAE method and the clean-up steps were optimized using design of experiments. Negative electrospray ionization (ESI) in the selected reaction monitoring (SRM) mode was used for MS detection. The use of two reactions for each compound allowed simultaneous quantification and identification in one run. The analytes were separated in less than 10 min. Deuterium-labeled ethylparaben-d5 (EPB-d5) and deuterium-labeled bisphenol A-d16 (BPA-d16) were used as surrogates. The limits of quantification ranged from 0.4 to 0.7 ng mL−1, while inter- and intra-day variability was under 11.1% in all cases. In the absence of certified reference materials, recovery assays with spiked samples using matrix-matched calibration were used to validate the method. Recovery rates ranged from 93.8% to 112.2%. The proposed method was satisfactorily applied for the determination of four selected parabens and bisphenol A in human milk samples obtained from nursing mothers living in the province of Granada
چکیده
یک روش تجزیه ای حساس و دقیق برای تعیین متیل، اتیل، پروپیل، و بوتیل پارابن و بیس فنول A در نمونه های شیر انسان توسعه یافت و اعتبارسنجی شد. ترکیبی از استخراج به کمک فراصوت (UAE) و یک روش تصفیه آسان و سریع با استفاده از مواد جاذب با موفقیت برای آماده سازی نمونه ها قبل از آنالیز کروماتوگرافی مایع با عملکرد بسیار بالا به همراه طیفسنجی جرمی متوالی (UHPLC-MS/MS) بکار برده شد. آنالیت ها با استفاده از استونیتریل و تابش فراصوت (3 سیکل 15 دقیقهای با دامنه %70) از نمونه های شیر انسان که بصورت انجمادی خشک شده بودند استخراج شده و سپس با جاذب های C18 تصفیه شدند. مهمترین پارامترهای تأثیرگذار در روش UAE و مراحل تصفیه با استفاده از طراحی آزمایشها بهینه شدند. برای آشکارسازی MS از یونیزاسیون افشانه الکترونی (ESI) منفی در حالت نظارت بر واکنش انتخابی (SRM) استفاده شد. استفاده از دو واکنش برای هر ترکیب، امکان شناسایی و تعیین مقدار را بصورت همزمان در یک بار اجرا فراهم کرد. آنالیت ها در کمتر از 10 دقیقه جداسازی شدند. اتیل پارابن نشاندار شده با دوتریوم (EPB-d5) و بیس فنول A نشاندار شده با دوتریوم (BPA-d16) به عنوان جایگزین انتخاب شدند. حدود تعیین مقدار بین ng mL-1 7/0-4/0 قرار داشت، درحالیکه تغییرات بین روز و میان روز در تمام موارد کمتر از %1/11 بود. به دلیل عدم وجود مواد مرجع مجاز، آزمون های بازیابی با نمونه های غنی شده با استفاده از کالیبراسیون مطابق با ماتریس برای اعتبارسنجی روش بکار برده شد. نرخهای بازیابی در محدوده %2/112-8/93 قرار داشت. روش پیشنهادی بطور رضایتبخش برای تعیین مقدار 4 پارابن انتخابی و بیس فنول A در نمونه های شیر انسان به دست آمده از مادران شیرده در ایالت گرانادا (اسپانیا) استفاده شد.
1- مقدمه
دوران کودکی مرحله ای حساس از رشد بوده و اختلالات ایجاد شده در فرایند رشد ممکن است باعث تغییرات ساختاری و عملکردی پایدار شود که میتواند بعدها خود را به شکل اختلال در عملکرد شناختی، بیماری های مزمن، بلوغ زودرس یا چاقی در بزرگسالی نشان دهد [1,2]. سنجش مقدار تماس کودکان با بسیاری از آلاینده های زیست محیطی اهمیت بالایی دارد....