Abstract
In the current paper the analytical conditions for the determination of ten free organic acids by GC-MS are studied with the aim to establish a method for organic acid profiling in human urine to be used as a tool for the detection of metabolic or other health disorders. Studies included the GC-MS method development, the derivatization , trimethylsilylation, reaction conditions, the stability of the standard solutions during storage in the freezer, and the stability of the formed trimethylsilyl derivatives. Best results were obtainedat a derivatization temperature of 50 C, and a reaction time of 30 min. Standard solutions were stable for 22 days, derivatized samples were stable at least for 30 h when stored at −24 C. GC-MS analysis achieved sensitive determination of the organic acids under study with limits of detection ranging from0.03 mmol/mol creatinine for glutaric acid, to 0.34 mmol/mol creatinine for glycolic acid. Within-day and day-to-day assay imprecision was found satisfactory with relative standard deviations being below 10%.The developed method was successfully applied to the quantitative analysis of free organic acids in urine samples obtained from hospitalized children. Creatinine-corrected excretion rates of all analyzed organic acids were within reference intervals
چکیده
در مقاله حاضر شرایط تجزیه ای برای تعیین ده اسیدهای آلی آزاد GC-MS با هدف ایجاد روشی برای پروفایل اسید های آلی در ادرار انسان به عنوان یک ابزار برای تشخیص سوخت و ساز بدن و یا سایر اختلالات مورد استفاده قرار گرفته است. مطالعات انجام شده شامل، توسعه روش GC-MS ، شرایط واکنش مشتق (trimethylsilylation)، تثبیت حلالهای استاندارد در هنگام ذخیره سازی در فریزر و ثبات مشتقات trimethylsilyl شکل گرفته است. بهترین نتایج در دمای50 C و زمان واکنش 30 دقیقه به دست آمد. حلال های استاندارد برای 22 روز با ثبات بود، نمونه ها حداقل برای 30 ساعت در -24 C ذخیره شده و پایدار بودند. تجزیه و تحلیل GC-MS مقدار اسیدهای آلی مورد مطالعه را تا حدود 0.03 میلی مول / مول کراتینین برای گلوتاریک اسید و تا میزان 0.34 میلی مول / مول کراتینین برای اسید گلیکولیک اندازه گیری کرد. عدم دقت روش در عرض روز و روز به روز با انحراف استاندارد نسبی زیر 10٪ رضایتبخش است. روش توسعه یافته با موفقیت برای تجزیه و تحلیل کمی اسیدهای آلی آزاد در نمونه ادرار به دست آمده از کودکان بستری استفاده شد. نرخ دفع کراتینین برای تمام اسیدهای آلی تجزیه و تحلیل شده، بر اساس مراجع تصحیح شده است.
1-مقدمه
طیف سنجی کروماتوگرافی توده گاز (GC-MS) اولین روش انتخابی برای اندازه گیری مولکولهای کوچک متابولیسم و به ویژه متابولیت های اولیه مانند اسیدهای آلی و اسیدهای آمینه در تنظیمات بالینی است]1[. این اولویت ناشی از مزایای قابل توجهی ارائه شده توسط GC-MS، مانند وجود کتابخانه تجاری طیفی، امکان مقایسه مستقیم و تبادل نتایج از آزمایشگاه های مختلف است. اصول کروماتوگرافی بدون چالش و تجربه فراوانی در این زمینه دارد. با وجود پیشرفت های اخیر در کروماتوگرافی مایع (LC)، مانند ظهور HILIC و یا حالت های LC های دیگر که نگهداری خوبی از ترکیبات قطبی نشان می دهد ، تجزیه و تحلیل LC-MS/MS اسیدهای مولکول کوچک ، همچنان یک چالش باقی مانده است...