Probiotics are live microorganisms which, when administered in adequate amounts, confer a health benefit on the host. Standard culture techniques are commonly used to quantify probiotic strains, but cell culture only measures replicating cells. In response to the stresses of processing and formulation, some fraction of the live probiotic microbes may enter a viable but non-culturable state (VBNC) in which they are dormant but metabolically active. These microbes are capable of replicating once acclimated to a more hospitable host environment. An operating definition of live probiotic bacteria that includes this range of metabolic states is needed for reliable enumeration. Alternative methods, such as fluorescent in situ hybridization (FISH), nucleic acid amplification techniques such as real-time quantitative PCR (RT-qPCR or qPCR), reverse transcriptase (RT-PCR), propidium monoazide-PCR, and cell sorting techniques such as flow cytometry (FC)/fluorescent activated cell sorting (FACS) offer the potential to enumerate both culturable and VBNC bacteria. Modern cell sorting techniques have the power to determine probiotic strain abundance and metabolic activity with rapid throughput. Techniques such as visual imaging, cell culture, and cell sorting, could be used in combination to quantify the proportion of viable microbes in various metabolic states. Consensus on an operational definition of viability and systematic efforts to validate these alternative techniques ultimately will strengthen the accuracy and reliability of probiotic strain enumeration

چکیده

پروبیوتیک ها میکروارگانیسم های زنده ای هستند که زمانی که مقدار ان مناسب باشد منجبر به سلامتی میزبان می شود. روش های کشت استاندارد به طور معمول برای اندازه گیری سویه های پروبیوتیک استفاده می شود اما کشت سلول فقط سلول های تکثیر شده را اندازه گیری می کند. در پاسخ به استرس های پردازش و فرموله شده برخی فراکشن های میکروب های پروبیوتیک زنده ممکن است وارد مرحله مقاوم غیر قابل کشت شوند (VBNC) که در ان حالت به شکل خفته بوده اما از نظر متابولیکی فعال هستند. این میکروب ها قادر هستند که نوع سازگار رابه تعداد بیشتری از میزبانان پذیرنده در محیط تکثیر کنند. تعریف عملکرد باکتری پروبیوتیک زنده که شامل این رنج از مرحله متابولیکی می شود برای شمارش صحیح لازم است. روش های متناوب مانند هیبریداسیون فلیورسنس درجا (FISH) روش های تکثر اسید نوکلییک مانند روش PCR کمی ریل تایم ) RT-qPCRیا Qpcr ) ترانسکریپتاز معکوس (RT-PCR)٬ پروپیدیوم مونوازید –PCR٬ و روش های ذخیره سازی سلول مانند جریان سیتومتری (FC) سلول ذخیره شده فعال فلئورسنت (FACS) به طور بالقوه شمارش هردو نوع باکتری قابل کشت و باکتری VBNC را پیشنهاد می کند. روش های مدرن ذخیره سازی سلول قدرت تعیین فراوانی سویه های پروبیوتیک و فعالیت متابولیک ان را با سرعت توان عملیاتی بالا را دارد. روش هایی مانند تصویربرداری بصری٬ کشت سلولی٬ و ذخیره سازی سلول می تواند در ترکیب کمی تناسب میکروب های مقاوم در مراحل مختلف متابولیک استفاده شود. اجماع تعریف عملیاتی تلاش زیست پذیری و سیستماتیک جهت تایید روش های متناوب بالاخره منجر به دقت و قابلیت اطمینان شمارش سویه پروبیوتیک تقویت خواهد شد.

1-مقدمه

پروبیوتیک هامیکروارگانیسم های زنده هستند که زمانی که به مقدار مناسبی برسند منجر به سلامتی میزبان خود می شوند. پروبیوتیک ها دارای تاریخچه طویل در مصرف سالم غذاهای تخمیری مانند ماست و خوارک های ترش و منفعت قابل توجهی در استفاده از انها به عنوان مضاف غذایی و مکمل دارد. لاکتوباسیلوس و بیفیدوباکتریوم نوعی از باکتری را تشکیل می دهد که به طور گسترده برای ایجاد پروبیوتیک مورد استفاده انسان به کار می رود...