Abstract
Information about concentration, molecular structure, binding events, and motion can be obtained using fluorescence spectroscopy methods.Fluorescence polarization spectroscopy is one such method, which studies the relationship between the polarization of light that is used for excitation and light that is subsequently detected from fluorescence.The extent of change of polarization between excitation and emission can be used to study physical processes such as rotational diffusion,extent of denaturation, and orientation at surfaces. In this article Mann and Krull describe the underlying principles to the technique and show how fluorescence polarization spectroscopy has contributed to protein analysis
چکیده
اطلاعات در مورد غلظت، ساختار مولکولی، وقایع پیوندی و حرکت را میتوان با استفاده از روش طیف سنجی فلورسانس به دست آورد. طیف سنجی فلورسانس قطبشی، روشی است که به مطالعه رابطه بین قطبش نور میپردازد و برای تحریک و نور استفاده میشود که بلافاصله از فلورسانس شناسایی شده است. میزان تغییر قطبش بین تحریک و نشر را میتوان برای مطالعه فرایندهای فیزیکی مانند انتشار چرخشی، میزان مصنوعی سازی و جهت گیری در سطوح استفاده کرد. در این مقاله Mann و Krull اصول اساسی تکنیک را توصیف کردند و نشان دادند که چگونه طیف سنجی فلورسانس قطبشی در تجزیه و تحلیل پروتئین شرکت کرده است.
1-مقدمه
بررسی روشهای قطبشی برای مطالعه ساختار مولکولی، تعیین حرکت و مسافت توسط Perrin ارائه شد ]1[، و بعد از آن توسط Weber استفاده شد ]2[. این فرآیندهای فیزیکی، پایه توسعه روشهای تحلیلی کمی است که در آن تشخیص انتخابی یک سیگنال تحلیلی مورد نظر را میتوان با تمایز بر اساس زاویه قطبشی به دست آورد.
فلورسانس، فرایند نشر فوتون به عنوان یک نتیجه از بازگشت یک الکترون در یک اوربیتال با انرژی بالاتر به اوربیتال با انرژی پایین تر است. بسیاری از فلوئوروفورها (مولکول نشرکننده) به مدت 5-10 تا 8-10 ثانیه در حالت تحریک شده باقی میمانند (طول عمر متوسط فلورسانس) ]3[. جذب یک فوتون در فرایند تحریک 15-10 ثانیه طول میکشد. بنابراین، یک تأخیر زمانی قابل توجهی بین جذب و فلورسانس وجود دارد و یک مولکول یا اجزای تشکیل دهنده آن میتواند جابجایی موضعی قابل توجهی در زمان بین جذب و نشر داشته باشد.
اصطلاح قطبش یک جهت گیری ممتاز در فضا ارائه میدهد. در مورد امواج نور، جهت گیری نوسانات عرضی است که میتواند قطبی باشد. یک منبع نور بر نشر از بسیاری از اتم ها و مولکول ها مبتنی است که معمولا امواج الکترومغناطیسی به عنوان مجموعه ای از همه جهت گیریهای نشر کننده ها نشر میکنند.